绿茶茶多酚防癌作用的分子机制及其药代动力学的研究进展

李志铭　刘宗潮　管忠震

关键词：绿茶茶多酚；药理作用

中图号：R73053　

茶叶气味芬芳，是世界上仅次于水的第二大饮料。按加工工艺的不同可分为绿茶、红茶和乌龙茶。占干重30％的绿茶茶多酚(以下简称茶多酚)主要为黄烷醇，通常称儿茶素。其中以表没食子儿茶素没食子酸酯[(－)-epigallocatechin-3-gallate(EGCG)]含量最高，占儿茶素的80％左右。一杯200ml绿茶(中国杭州)约含142mgEGCG、65mgEGC、28mgECG、17mgEC和76mg咖啡因[1]。饮茶是否有益于健康?这是一个重要而复杂的问题。茶叶与肿瘤发生的流行病学研究已有大量正相关、负相关和无相关的文献报告〔1～2〕。结论如此纷纭，可能与各地区地质条件、居民生活习惯(如饮茶量、种类、温度、还有吸烟和饮酒习惯等)，甚至茶叶本身的定义不尽相同有关。七十年代以来，许多国家对茶叶的防癌作用进行了广泛的研究，越来越多的实验室研究证实茶叶确能抑制肿瘤。本文将就其研究新进展分子机制和药代动力学方面作一综述。

1　茶叶的生物学活性和药理学作用

黄烷醇类易被氧化为相应的O-醌类，二者可作为氢受体和氢供体。在黄烷醇的结构中，5位和7位二羟基团和1位氧能使6位和8位碳原子产生强烈的亲核性，C-O或C-C骨架的形成可使黄烷醇发生氧化聚合。茶多酚对金属离子、生物碱和生物大分子，如脂类、碳氢化合物、蛋白质和核酸有高度的亲和力。这是茶多酚多种作用的结构基础〔1〕。

茶多酚有高于VitC、E的强烈抗氧化、清除自由基的作用，主要通过以下四个机制〔1,2〕：①因茶多酚具有“Catechol”结构，从而是很强的金属离子螯合剂，能结合并降低在Fenton和HaberWeiss反应中产生反应氧自由基所必须的游离铁和铁离子；②茶多酚是超氧阴离子自由基和羟自由基很强的捕获剂，这两种自由基引起DNA和其它细胞内分子的损伤及脂质过氧化反应；③反应氧自由基能损伤DNA，改变基因表达，在肿瘤发生中起重要作用。黄烷醇类能与过氧自由基发生反应，从而终止脂质过氧化链反应；④增强谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶、酯还原酶、谷胱甘肽-S-转移酶的活性。

茶多酚能诱导肿瘤细胞凋亡。谢冰芬等[3]用流式细胞术发现茶多酚可使鼻咽癌CNE2细胞停滞于G1期，并诱导其凋亡。另有学者发现EGCG诱导人肺癌细胞PC-9停滞于G2-M期〔4〕，诱导Molt4B人淋巴细胞性白血病细胞的凋亡〔5〕。茶叶中的咖啡因对不同的肿瘤细胞凋亡有双向性的作用。茶碱也能诱导细胞凋亡。

肿瘤的形成是多因素、多阶段、多基因突变的过程。已知有许多化学致癌物及物理因素能诱发和促进肿瘤的形成。人们发现绿茶及其组分茶多酚对多种肿瘤形成的各个阶段都有预防和抑制作用。在大量动物模型中，茶多酚不仅可抑制各种致癌物的致癌发生率，还可降低已形成肿瘤的大小、数目及其侵袭和转移〔6〕。

另外，茶多酚还有阻止亚硝基化反应、抗突变、放射防护、抑菌、提高免疫力、抗老化、降压、降脂、抗血栓和体外杀精等作用。本室刘宗潮〔7，8〕等证实绿茶提取物对DNA拓扑异构酶Ⅱ、DNA引物酶多聚酶α复合体有抑制作用，与其抗肿瘤作用有密切关系。

2　茶多酚防癌作用的分子机制

茶多酚防癌作用的机制尚未完全清楚。目前的研究进展有：增强抗氧化酶(谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶和醌还原酶)和Ⅱ相酶(如谷胱甘肽-S-转移酶)的活性；抑制放射线或TPA诱导的上皮鸟氨酸脱羧酶(ODC)和环氧化酶；抑制蛋白激酶C和细胞增殖；抗炎活性和加强细胞间和缝隙连接等〔2〕；抑制上皮生长因子(EGF)与其受体的相互作用〔9〕；抑制肿瘤细胞的核苷转运，阻断外源性核苷对于抗代谢药的抵消作用，增强阿糖胞苷、氨甲喋呤对肿瘤细胞的杀伤作用〔10〕。另外，最近还有报道EGCG还能强烈抑制端粒酶的活性，引起肿瘤细胞端粒的缩短、染色体的改变和对与细胞寿命相关的β－半乳糖苷酶的表达的抑制〔11〕。

2.1茶多酚抑制一氧化氮合成酶(NOS)的诱导

亚硝酸盐能引起亚硝基化，是腌制食品中的致癌物。哺乳动物也能产生内源性的亚硝酸盐〔12〕。NO在体内由L精氨酸在NAPDH和氧原子参与下经NOS催化合成。分子克隆及序列分析示NOS至少存在3种异构体：Ⅰ和Ⅲ异构体由Ca2＋钙调素激活，产生生理条件下的低水平的NO。它有广泛的生物学效应。Ⅱ异构体即iNOS(诱导性NO合成酶)，一旦产生就能长期激活，持续产生高浓度的NO。后者在体外使脱氧核苷酸和碱基发生脱氨基，在体内是致突变的。胞内高浓度的NO导致基因毒性的机制是：NO与氧原子反应形成NO2，再聚合为N2O4，并在水中自发歧化为硝酸盐与亚硝酸盐。硝酸盐在体内也能还原为亚硝酸盐。亚硝酸盐与食物中氨基酸或酰胺反应生成致癌物N亚硝酸盐复合物，直接对DNA碱基亚硝基化而脱氨基、DNA链的断裂和过氧化亚硝酸盐和/或羟自由基的形成而氧化DNA〔13〕。

已克隆出鼠iNOS基因5′端的一部分。它的启动子含有TATA盒及转录因子(NKκB和干扰素调节因子)的结合位点。NFκB是从免疫球蛋白的κ轻链基因增强子的κ位点(5′-GGGACTTTCC-3′)处发现特异性结合的转录因子。现已知许多与免疫和炎症相关的基因调控区均含此顺式作用元件。NFκB属于Rel族，一般指P50/P55杂二聚体。NFκB在胞浆中存在，并被IκB(inhibitorofNFκB)结合抑制。IκB有IκBα和IκBβ等6种异型体。当IκBα上的Ser32、Ser36磷酸化后就从NF-κB上脱离下来，并经泛素途径分解。释放出的NF-κB与HMG-1(HighmobilitygroupⅠ)形成三元复合物，结合于κ位点激活转录。同时IκBα基因也被激活，从而反馈抑制NFκB，保持转录平衡〔14〕。Kleinert等〔15〕发现至少存在3种不同的信号传导通路激活转录因子NFκB，从而激活iNOSmRNA的表达：酪氨酸激酶受体通路(由IFN、TNFα、LPS诱导)、蛋白激酶A通路(由8OhdG诱导)和蛋白激酶C通路(由TPA诱导)。ROIs(reactiveoxygenintermediate)也参与NF-κB的活化。同时NF-κB的激活机制有细胞特异性。

EGCG是目前第一个同时抑制iNOS基因的表达和酶活性的复合物〔12〕。EGCG以浓度依赖关系特异地抑制iNOSmRNA的表达。EGCG对激活NFκB的信号传导通路的主要作用机制为：(1)抑制LPS等与其受体的相互作用(sealingeffect)；(2)清除ROIs；(3)抑制蛋白激酶〔14〕。而且，EGCG还可阻断信号诱导IκB的磷酸化；阻断N亚硝酸盐复合物、过氧化亚硝酸盐或羟自由基的形成。另外，NOS的结构在氨基端相似于细胞色素P450氧化酶，在羧基端相似于细胞色素P450还原酶。已知绿茶多酚能与不同的肝细胞色素P450s结合并抑制依赖P450的各功能，所以它能抑制NOS的酶活性〔12，13〕。

2.2茶多酚对肿瘤启动剂诱导的AP-1(ActivatorProtein1)和细胞转化的抑制

近来，人们发现丝/苏氨酸家族的丝原激活蛋白激酶(MAPKs)是蛋白激酶级联反应的中间体，是细胞内重要的激酶系统。MAPK包括胞外信号调节蛋白激酶(extracellularsignal-regulatedproteinkinases,ERKs)和c-JunN-末端激酶(c-JunN-terminalkinases,JNKs)。ERKs主要由生长因子激活，部分也被细胞应激信号激活。JNKs即应激激活蛋白激酶(SAPK)〔16〕。AP1亦称Fos/Jun杂二聚体。正常情况下，核内无FOS，仅有少量JUN。fos和jun均属即早基因。在GFs(生长因子)刺激后15分钟即呈现FOSmRNA增高，30分钟达高峰，迅速合成FOS。JUN是由331个氨基酸组成，可由PKC催化其Ser63、Ser73磷酸化而激活。活化的JUN和新生成的FOS聚合为杂二聚体(即AP-1)。FOS和JUN均含有“LZ”(亮氨酸拉链)的保守序列，可结合于TRE(5′-TCACTCA-3′)，促进许多基因的转录〔17〕。

转录因子AP-1调节着MAPKs。c-Jun的Ser63/73突变引起的c-Jun对生长因子、佛波酯和紫外线诱导的信号通路的非应答。EGCG或茶黄素对ErK1或ErK2无抑制作用，而是在Ser73位点抑制c-Jun蛋白的磷酸化。EGCG还抑制JNK的活性。因此，茶多酚抑制了肿瘤促进剂诱导的AP-1活性的升高〔18〕。有学者〔18〕用儿茶素3种同系物对TPA诱导鼠成纤维细胞的转化有抑制作用。并发现在儿茶素类中，有顺式结构、在R1位附加有羟基、R2位附加有没食子酸的衍生物(如EGCG)有更强的抑制效应。咖啡因对细胞转化的抑制很弱。因此EGCG、茶黄素，而不是咖啡因，抑制了TPA-或EGF-诱导的细胞转化。

2.3封闭作用(sealingeffect)

EGCG抑制肿瘤促进剂TPA激活PKC是通过以下三方面：①抑制TPA与受体的作用；②EGCG与磷脂双分子层相互作用；③EGCG阻碍5′-三磷酸腺苷和TPA结合到PKC的能力。绿茶提取物、EGCG抑制肿瘤促进剂teleocidin对PKC的激活。EGCG抑制依赖雌激素的乳腺癌MCF-7细胞中雌激素与其受体的作用。Komori等〔19〕把绿茶提取物、EGCG阻止肿瘤促进剂、激素、生长因子与受体的相互作用，称为sealingeffect。

3　茶多酚的药代动力学

1997年，ChenL.S.等〔20〕首次报道了EGCG、EGC和EC在啮齿动物中的吸收、分布、代谢、排泄过程。尽管EGCG、EGC、EC化学结构相似，但药代动力学却不尽相同。它们在血浆、组织中的水平采用HPLC测定。静脉注射DGT(去咖啡因的绿茶)25mg/kg后，EGCG、EGC和EC的血浆浓度符合二室模型。它们的β相半衰期(t1/2B)分别是212、45和41min，清除率(CL)分别是2.0、7.0和13.9ml/min/kg，表观分布容积(Vd)分别为1.5、2.1、和3.6dl/kg。EGC和EC和k12和k21(中央室与周围室间的分布速率常数)相似，但EGCG的k12比k21高3倍，提示EGCG更易分布于周围室。EGCG的t1/2β较长，CL较小，提示EGCG比EGC和EC在体内能停留更长时间。当用EGCG静注时，t1/2β为135min，清除率为725ml/min/kg，Vd为22.5dl/kg，提示在DGT中有其他物质影响EGCG的浓度和排泄。DGT灌胃给药(200mg/kg)时，EGCG、EGC和EC的生物利用度分别为13.7％、31.2％和0.1％。静脉注射DGT(25mg/kg)后，EGCG在小肠组织中浓度最高，其半衰期(t1/2)为175min。EGC和EC在肾中浓度最高，t1/2分别为29min和28min。EGCG的AUC在肠中比肾中高4倍，而EGC和EC的AUC在肠和肾中相似，提示EGCG由胆汁排泄，而EGC和EC既从胆汁也从尿中排泄。他们还认为EGCG经加入饮水中给药比灌胃给药吸收更好。去咖啡因的绿茶提取物中的EGCG的吸收速率常数(Kd)比纯EGCG高3.6倍。基于每单位EGCG产生的AUC和Cmax，DGT似乎比纯EGCG更有效。值得一提的是Yang〔21〕发现把1.5g、3.0g、4.5g去咖啡因的绿茶溶于500ml水后给人饮用，随剂量由1.5g升至3.0g时，茶多酚的血浆Cmax也增加2.7～3.4倍，但当剂量增至4.5g时Cmax却不能明显增加。这被称为饱和现象。

结束语

近年来，植物来源的药物倍受青睐。不只因它对发现新药有很大潜力，还可为设计更理想的新药提供独特的化学结构，后者可被用为创制新药的先导化合物。众所周知，癌的发生至少经过三个阶段：即始发(initiation)、促癌(promotion)、演进(progression)。茶多酚的作用机制，特别是促癌阶段的分子机制是研究的热点。茶多酚来源于天然植物，茶叶为平常人家饮用。研究它的药理机制，特别在防癌抗癌方面，不仅顺应了抗癌药物从传统人工合成细胞毒药物向开发天然产物转变的大趋势，也必将促进它的进一步应用。

参考文献

1　YangCS,WangZY.Teaandcancer〔J〕.J.Natl.CancerInst,1993,85:1038～1049.

2　StonerGD,MukhtarH.Polyphenolsascancerchemopreventiveagents〔J〕.JCellBiochemSuppl,1995,22:169～180.

3　郝东磊，谢冰芬，刘宗潮，等.茶多酚对人鼻咽癌CNE2细胞周期影响的流式细胞术的检测〔J〕.国外医学，1998，25(5)：64.

4　OkabeS,SuganumaM,HayashiM,etal.Mechanismsofgrowthinhibitionofhumanlungcancercellline,PC9,byteapolyphenols〔J〕.JpnJCancerRes,1997,88(7):639～643.

5　AchiwaY,HibasamiH,KatsuzakiH.Inhi-bitoryeffectsofpersimmon(Diospyroskaki)extractandrelatedpolyphenolcompoundsongrowthofhumanlymphoidleukemiacells〔J〕.BioscibiotechnolBiochem,1997,61(7):1099～1101.

6　SazukaM,MurakamiS,IsemuraM.Inhib-itoryeffectsofgreenteainfusiononinvitroinvasionandinvivometastasisofmouselungcarcinomacells〔J〕.CancerLett1995,98(1):27～31.

7　谢冰芬，刘宗潮，潘启超，等.毛叶茶提取物的抗瘤作用以及对DNA拓扑异构酶Ⅱ抑制作用〔J〕.癌症，1992，11(6)：424～428.

8　朱孝峰，刘宗潮，潘启超，等.绿茶提取物对肿瘤细胞DNA引物酶多聚酶α复合体的影响〔J〕.癌症，1997，16(3)：161～164.

9　LiangYC,LinSSY,ChenCF.SuppressionofextracellularsignalsandcellproliferationthroughEGFreceptorbindingby(－)epigallocatechingallateinhumanA431epidermoidcarcinomacells〔J〕.J.CellBiochem,1997,67(1):55～65.

10　甄永苏.天然来源的新型抗肿瘤生化调节剂〔J〕.国外医学，1998，25(5)：7～8.

11　ImadNaasani,HiroyudiSeimiya.Telomerasaeinhibition,telomereshortening,andsenescenceofcancercellsbyteacatechins〔J〕.BiochemicalandBiophysicalReｓearchCommnications,1998,249:391～396.

12　TannenbanmSR,GoldmannP.Nitritesynthesisinthegermfreeandconventionalrat〔J〕.Science,1981,212:56～58.

13　ChanMM,FongD,HoCt,Inhibitionofinduciblenitricoxidesynthasegeneexpressionandenzymeactivitybyepigallocatechingallate,anaturalproductfromgreentea〔J〕.Biochem.Pharmacol,1997,54(12):1281～1286.

14　LinYL,LinJK.(－)Epigallocatechin3gallateblockstheinductionofnitricoxidesynthasebydownregulatinglipopolysaccharideinducedactivityoftranscriptionfactornuclearfactorkappaB〔J〕.Mol.Pharmacol,1997,52(3):465～472.

15　KleinertHC,EuchenhoferⅡB，OrstermannU.F.Inmurine3T3fibroblasts,differentsecondmessaggerpathwaysresultingintheinductionofNOsynthaseⅡ(iNOS)convergeintheactivationoftranscriptionfactorNFκB〔J〕.JBiol.Chem,1996,271:6039～6044.

16　RongYu,JiaoJJ,DuhJL.Activationofmitogenactivatedproteinkinasesbygreenteapolyphenols;potentialsignalingpathwaysintheregulationofantioxidantresponsiveelementmediatedPhaseⅡenzymegeneexpression〔J〕.Carcinogenesis,1997,18:451～456.

17　DongZ,MaW,HuangC.Inhibitionoftumorpromoterinducedactivatorprotein1activationandcelltransformationbyteapolyphenols,(－)epigallocatechingallate,andtheaflavins〔J〕.CancerRes,1997,57(19):44144419.

18　LeeSF,LinJK.InhibitoryeffectsofphytopolyphenolsonTPAinducedtransformation,PKCactivation,andcjunexpressioninmousefibroblastcells〔J〕.NatrCancer,1997,28(2):177～183.

19　KomoriA,YatsunamiJ,OkabeS.Anticarcinogenicactivityofgreenteapolyphenols〔J〕.JpnJ.ClinOncol,1993,23(3):186～190.

20　ChenLS,LeeMJ.Absorption,distribution,andeliminationoftheteapolyphenolsinrats〔J〕.DrugMetaandDisp,1997,25(9):1045.

21　YangCS,ChenL.Bloodandurinelevelsofteacatechinsafteringestionofdifferentamountsofgreenteabyhumanvolunteers〔J〕.CancerEpideniolBiomarkersPrev,1998,7(4):351～354.

精选阅读

茶氨酸的研究进展

摘要 茶氨酸是茶叶的特征氨基酸。大量研究表明,茶氨酸的含量不仅对茶叶的品质有很大的影响,而且具有促进大脑功能和神经的生长、抗肿瘤、降压安神等功效。本文综述了近十余年来国内外在茶氨酸的形成、积累、测定、制备及应用方面的研究进展。

关键词 茶氨酸;形成;积累;测定;制备;应用

1 引言

至今为止人们在茶叶中已发现25种氨基酸。其中茶氨酸约占氨基酸总量的50%。大多数学者认为茶氨酸是茶叶的特征氨基酸,因为到目前为止除了在茶梅、山茶、油茶、簟等四种天然植物中检测出其微量存在外,其他植物中尚未发现。茶氨酸(theanine)是1950年日本学者酒户弥二郎首次从绿茶中分离并命名的,它属酰胺类化合物,化学命名:Ｎ乙基Ｌ谷氨酰胺,结构式:ＨＯＣＯＣＨＮＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＯＮＨＣＨ2ＣＨ3。自然存在的茶氨酸均为Ｌ型,纯品为白色针状结晶,熔点217～218℃(分解),比旋光度[α]20Ｄ=0 7°,极易溶于水,水解度呈微酸性,有焦糖香及类似味精的鲜爽味,研究证明它的含量与绿茶的品质密切相关,相关系数为0 787～0 876[1]。

2 茶叶中茶氨酸研究进展

作为茶叶的特征氨基酸,茶氨酸几乎存在于茶树的所有器官和组织中。经大量研究表明,茶氨酸在茶树的根部形成,然后向新梢积聚,因而茶树新梢中茶氨酸含量最高。茶氨酸的形成是茶树储存氮的手段之一,这是因为茶氨酸被茶氨酸水解酶水解为谷氨酸和乙胺,乙胺在胺氧化酶的作用下产生氨和乙醛,氨可作为氮源供茶树的幼龄组织生长,因此茶氨酸是茶树幼芽光合作用开始前有机碳骨架合成的起始物,而且也是茶树中多酚类物质的重要前体。茶氨酸在茶树中的积累与光照、温度和合成前体密切相关。研究发现当温度为25℃,黑暗条件下,在培养基中加入盐酸乙胺能明显增加茶氨酸的积累。1992年我国学者李荣林等对茶树新梢中茶氨酸的分布情况及其在不同季节、不同品种和不同栽培条件下含量的变化作了较全面的研究[2]。他们发现,随着茶树叶片成熟度的增加,茶氨酸的含量逐渐降低,因此茶氨酸可作为茶鲜叶嫩度的化学指标之一;茶氨酸在新梢中的含量随季节的不同存在显著的差异,其在春茶新梢中的含量是在夏茶中的4倍,是在秋茶中的7倍;环境对茶氨酸含量也有较大的影响,土壤的ｐＨ值下降,不利于茶氨酸的积累,而氨态氮的存在和遮荫环境有利于茶氨酸的积累; 茶叶制作过程不同,其茶中茶氨酸的含量也有明显变化。绿茶制造过程中由于谷氨酸的转化使茶氨酸的含量呈增加趋势;黄茶、青茶、黑茶制造过程中谷氨酸的变化不明显,茶氨酸呈减少趋势;白茶制造过程中茶氨酸变化的特点是长时间的萎凋中蛋白质分解,谷氨酸增多并向茶氨酸转化,因此茶氨酸开始表现为增加趋势直至干燥才有所减少;而红茶发酵过程茶氨酸变化复杂,有增有减,总趋势是减少。虽然人们普遍认为茶氨酸可作为评价绿茶质量的重要标志之一,但对红茶茶氨酸的含量与其品质的相关性问题有着不同的看法。

K.HelenEkborgOtt等在对17种茶的茶氨酸含量进行分析时发现, 某些红茶中茶氨酸的含量并不比绿茶和乌龙茶低,有的红茶 (如中国的云南茶)中茶氨酸的含量甚至还高于某些绿茶 [3]。赵和涛等在研究茶氨酸的生化特性时测定了我国六大茶类中茶氨酸的含量[4]发现以白茶中茶氨酸的含量最高,为30079mg/100g;其次是绿茶和黄茶,在17301～1944 7mg/100g之间;红茶相对绿茶低一点,为14616mg/100g;青茶为6274mg/100g;含量最低的是黑茶,只有711mg/100g,这可能是由于其加工过程中特有的渥堆作用导致了茶氨酸大量损失。因此也有学者认为茶氨酸的含量也可作为红茶品质的重要评价因子之一。湖南农业大学的唐和平等对9个茶树品种及红山茶、白山茶进行了氨基酸组成的分析[5],并比较了其中茶氨酸含量的差异,他们发现山茶中虽有茶氨酸存在,但含量甚微;通过对不同进化层次的茶树品种进行茶氨酸含量分析,证明茶氨酸含量随茶树进化层次的提高呈积累趋势,并以山茶中也发现茶氨酸说明茶与山茶存在一定的亲缘关系,由此支持茶树应属山茶属的观点。1997年齐贵年等比较了经蒸汽杀青、锅炒杀青和滚筒杀青的扁形特种绿茶氨基酸含量的变化[6],结果表明,不同工艺杀青对氨基酸组分含量有一定的影响,其氨基酸总量和茶氨酸含量均为蒸汽杀青>锅炒杀青>滚筒杀青,并且提出可通过工艺技术对茶叶中茶氨酸和其他氨基酸的含量进行调控。同年钟俊辉等研究了不同培养条件、不同碳源和不同环境对茶愈伤组织培养及其茶氨酸的积累的影响[7],发现激素ＩＡＡ和6 ＢＡ结合作用时,以ＩＡＡ2mg/Ｌ和6 ＢＡ4mg/Ｌ时对茶氨酸积累最有利;而培养基中碳源不同,愈伤组织的增长速率及其茶氨酸的含量的差异并不显著,但当用不同浓度的蔗糖作为碳源时发现,随着蔗糖浓度的增加茶氨酸的积累呈上升趋势。与其他文献相同,他们的研究结果表明25℃、黑暗条件有利于茶氨酸的积累。

3 茶氨酸的测定与制备茶氨酸的分析方法有多种,有传统的阴离子交换树脂层析法、薄层色谱法、气相色谱法[8,9]等。近十多年来随着高效液相色谱技术的迅猛发展,分析速度、灵敏度和自动化程度的不断提高,该技术越来越广泛地应用于氨基酸分析领域。因大多数氨基酸无紫外吸收和荧光发射特性,标准折射探测仪对氨基酸检测也无足够的灵敏度,所以为提高分析检测灵敏度和分离选择特性,通常将其衍生。二十世纪八十年代中期美国Ｗａｔｅｒｓ公司率先推出了氨基酸自动分析系统及技术[10],他们采用异氰酸苯酯(ＰＩＴＣ)作为衍生试剂,柱前衍生,反相色谱分离的原理,用紫外检测进行氨基酸分析。随后,惠普公司推出了ＨＰＡｍｉｎｏＱｕａｎｔ氨基酸分析系统及技术[11],采用邻苯二甲醛(ＯＰＡ)和氯甲酸芴甲酯(ＦＭＯＣ)作为衍生试剂,既可用紫外又可用荧光进行检测。董泗建等对几种柱前衍生的氨基酸分析法的色谱条件进行了改进[12],在降低成本的基础上进一步优化了分离效果。1994年Ｗａｔｅｒｓ公司又推出了一套全新的氨基酸分析技术,他们采用6 氨基喹啉 Ｎ 羟基琥珀酰亚胺基 氨基甲酸酯(ＡＱＣ)作为衍生试剂,以乙腈和水作为流动相,梯度洗脱,紫外或荧光检测器检测,该法简称为ＡＣＣＱ ＴＡＧ法。在日本学者莽也邦夫等采用高效液相色谱法测定了茶叶中茶氨酸含量之后,我国学者郭升平对用高效液相色谱测定茶叶中茶氨酸进行了较详细的研究[13],他采用ＷａｔｅｒｓＭ344高效液相色谱仪,以ＰＩＴＣ柱前衍生,反相Ｃ18柱分离(Ｗａｔｅｒｓ的Ｐｉｃｏ ＴａｇＴＭＨＡＡ柱),柱温43℃,梯度洗脱,用Ｍ990二极管阵列检测器,在ＵＶ243ｎｍ检测。在研究中他对用乙酸乙酯提取、用80%乙醇回流3ｈ提取和经盐酸水解等前处理的方法进行了比较,发现茶氨酸不能以酸水解方式提取,否则茶氨酸会分解成谷氨酸,而使测定结果偏低。随着近年来分析技术和分析手段的不断提高,毛细管电泳技术和液质联用技术也应用到了茶氨酸检测领域。ＫｉｅｈｎｅＡ等报道了采用热喷雾液质联用仪分析茶叶中多酚类物质的方法[14],他们通过测定其准分子离子峰同时测定了茶叶中的儿茶素、黄酮醇糖甙、黄酮糖甙及咖啡因、可可碱和茶氨酸。ＡｕｃａｍｐＪＰ等则研究了用毛细管电泳仪同时进行儿茶素、茶氨酸、咖啡因及没食子酸、抗坏血酸分析的方法[15]。

目前,高纯度的茶氨酸主要通过细胞组培、化学合成、微生物发酵和离子交换树脂分离等方式获取。人们用14Ｃ示踪的方法早已证实了茶树中茶氨酸合成前体是谷氨酸和乙胺。一般认为当培养基中乙胺的浓度为25ｍＭ时,茶叶愈伤组织的茶氨酸的生物合成为最大值。1998年陈瑛等研究了多种激素对茶愈伤组织合成茶氨酸的影响[16],他们对生长素(ＩＡＡ)、萘乙酸(ＮＡＡ)、吲哚丁酸(ＩＢＡ)、2,4 二氯苯氧乙酸(2,4 Ｄ)、6 苄基腺嘌呤(6 ＢＡ)、玉米素(ＺＴ)、激动素(ＫＴ)、和三十烷醇(ＴＡ)的不同浓度、不同配比进行试验,得出了茶愈伤组织生长和茶氨酸积累的较佳培养条件。除了利用细胞组织培养茶氨酸之外,化学合成也是得到高纯度茶氨酸的有效方法[17]。采用化学合成手段制造氨基酸始于二十世纪五十年代,它具有价格低,成本低,适合工业化生产的特点。但是化学合成制造的都是ＤＬ 型消旋体,需要进行拆分才能得到Ｌ 型产品。日本学者在这方面作了大量的工作,他们采用微生物固化酶分离ＤＬ 型氨基酸取得了成功。采用微生物发酵法可直接得到Ｌ 型氨基酸,但反应时间较长,设备规模较庞大,副产物也较多,需要进一步分离精制,成本相对较高。因此建立在化学合成法和微生物发酵法基础上的酶转化法或称酶工程技术应运而生了。这种技术是应用特定酶的催化作用,使某些化合物转化成相应的Ｌ 氨基酸。ＨｉｄｅｙｕｋｉＳｕｚｕｋｉ等报道了他们把这一技术应用到茶氨酸的制备中的最新研究成果[18],他们利用从细菌中得到的谷氨酰转肽酶作催化剂,将200ｍＭ谷氨酸和1 5Ｍ乙胺在ｐＨ为10,温度为37℃的条件下,保持2小时,获得120ｍＭ茶氨酸,转化率为60%。茶氨酸作为两性物质,选择适当的ｐＨ值,用离子交换树脂分离提取也是一种有效的手段,但这方面的报道并不多见。1998年陈瑛等报道了用离子交换法提取茶氨酸的研究结果[19],他们选用国产732阳离子交换树脂,从茶愈伤组织浸提液中提取茶氨酸,并讨论了洗脱液离子强度和ｐＨ值对树脂吸附茶氨酸的影响,以及上样浓度、洗脱速度对树脂交换过程的影响。

【深度】科学饮茶之健康临床研究进展

自《神农本草经》记载“神农尝百草，日遇七十二毒，得荼而解之”以来，茶的药用价值由来已久。如今，茶作为世界三大饮料之一，其对人体健康的促进效应是世界性研究热点之一。迄今为止，已有大量的体外实验和动物模型研究表明茶与其功效成分对包括癌症、心血管疾病、神经退行性疾病等诸多危害人体健康的疾病具有潜在的防治功效。同时，随着研究的深入，茶叶健康功效的作用机理也被逐渐厘清。这些研究成果为茶与健康临床试验的开展提供了科学支撑，而相关临床数据是决定能否将茶叶开发为药物造福人类的最直接证据。

茶与心血管疾病

随着人口老龄化趋势进一步发展，如何提高人们生命质量已成为全球关注的热点，尤其是心脑血管疾病已成为当今人类第一杀手，因此对其防治的意义不言而喻。近年来，已有流行病学研究表明，亚洲人和欧美人相比，罹患心血管疾病的比例明显少很多，除去遗传因素外，很多学者认为这可能与亚洲人有饮茶的习惯密切相关。现已有大量的体内外模型研究表明茶与茶多酚可以通过改善血管内皮功能，调节血管张力，改善糖代谢，增加胆固醇逆向转运，抑制泡沫细胞的形成，抑制氧化应激，调节免疫和影响血小板功能(黏附，聚集)来防治高血脂症、高血压、血栓、动脉粥样硬化和冠心病等心血管疾病。目前，我国已经成功将茶多酚开发成了治疗包括高血压、动脉粥样硬化及冠心病等在内的心血管疾病的中成药(心脑健)。

高血脂症

高脂血症(hyperlipidemia)，包括血脂代谢发生紊乱；脂肪代谢或转运异常；血浆中一种或几种脂质浓度，包括血浆总胆固醇(TC)及甘油三酯(TG)水平过高或血浆高密度脂蛋白(HDL)水平过低；人体血浆中TC、TG和各种脂蛋白含量高于同龄正常值者。高脂血症是中老年人常见的疾病之一，也是心血管疾病的一个重要危险因素。

Tokumaga等在日本对13916名健康工人(8476名男性，5440名女性)进行流行病学调查发现，绿茶饮用量与血浆中TC的浓度成反比。Zheng等于2011年对相关文献全面检索之后，对符合要求的14项随机对照实验进行meta分析表明，绿茶能显着降低血清中TC和LDL-C浓度。虽然已有大量流行病学表明绿茶以及茶多酚具有降血脂作用，但仍有不一致的结论。Princen等和Choi和Kim的流行病学调查则认为饮茶对高血脂的预防并没有积极的效果。这些流行病学的不一致性可能是由于调查人群的复杂性，饮食习惯的差异，调查方法不同等所致，所以需要临床试验加以验证。

应之和采用双盲法，对治疗组及对照组，分别给予口服茶多酚胶囊100mg/粒，维生素C片剂100mg/粒，两者均1日3次，每次2粒，结果表明，口服茶多酚胶囊8周后患者血脂各参数(TC、TG、HDL-C、LDL-C)均有显著改善，对高胆固醇血症总有效率为89.7%，对高甘油三酯血症的总有效率为92.8%，并且未见明显药物不良反应。

Maron等对中国6个地区医院的240名轻度或中度高脂血症患者进行双盲、随机、安慰剂作对照的试验，以评定茶多酚对患者TC、LDL-C、HDL-C和TG水平的影响，结果显示，12周后，服用茶多酚的患者与受试前自身相比，TC和LDL-C降低，HDL-C升高，而安慰剂组无显著效应。

近期，Nagao等在日本对240名内脏脂肪型肥胖患者进行的一项为期12周的平行双盲，多中心临床试验实验发现，每日摄入富含583mg儿茶素绿茶提取物的试验组，其体内脂肪，收缩压(SBP)，LDL-C水平显著降低，表明服用这种提取物有助于减少肥胖和心血管疾病的风险。

高血压

高血压(Hypertension)是一种由多基因遗传与环境因素交互作用而产生的以动脉血压升高为特征的临床综合征。由饮食的调整带来血压的变化可对高血压和心血管疾病的患病率有显著影响。茶作为全球流行饮料，已有大量资料报道茶中主要功效成分茶多酚具有降血压，减慢心率及增加冠状动脉流量的作用。

Hodgson等设计了一项随机双盲安慰剂对照试验，证明每天饮用3杯红茶持续6个月能够显著降低人体收缩压(SBP)，舒张压(DBP)。Clement和Ernst对PubMed和Cochrane图书馆中，关于绿茶饮用习惯与化学预防和心脑血管防治方面的临床试验，进行非系统性文献回顾，认为饮用绿茶可以预防高血压，降低中风的风险。临床上，牟乃洲等用茶色素联合卡托普利治疗原发性高血压80例，并随机设卡托普利的对照组60例行对比观察,结果表明每天口服125mg茶色素(心脑健)、25mg卡托普利3次的治疗组，其治疗高血压的有效率达81%，显著高于对照组60%，而且治疗组有明显改善微循环的功效。说明茶色素联合卡托普利对原发性高血压患者有较好的疗效并能起到巩固稳定血压，改善微循环的作用。。

已有研究发现，高血压病除有血液动力学异常外，并伴随一系列血液流变学改变，而且患者往往存在明显的自由基代谢紊乱现象。所以，对高血压患者的治疗除了直接作用于血压外，还可通过调节氧自由基和血液流变学改善病情。柯永胜和徐晓华观察茶多酚对原发性高血压患者(38例)氧自由基和血液流变学的影响，并与用肠溶阿司匹林治疗的30例作对照。临床观察表明，TP能明显提高红细胞SOD活性，降低血清MDA水平，降低全血比粘度、血浆比粘度和血浆纤维蛋白原水平，其药理效应优于肠溶阿司匹林。

血栓

血栓(Thrombus)是血流在心血管系统血管内面剥落处或修补处的表面所形成的小块，由不溶性纤维蛋白、沉积的血小板、积聚的白细胞和陷入的红细胞组成。血栓形成是一种涉及许多彼此相互作用的遗传和环境因素的多因素变化的过程。

血管内皮在维持血管内平衡的过程起着十分关键的作用。其作用主要有屏障功能，接受和传递信息以调节血管收缩或扩张，分泌血管活性物质，其生成的NO对维持血管内皮功能正常有着巨大的作用，而血管内膜损害是血栓形成的主要条件。Ras等对从Medline搜索的340项与茶和血流介导的舒张功能(FMD)有关的研究进行meta分析，表明每天饮茶2-3杯能大力提高血管内皮功能。

Jochmann等对红茶和绿茶改善血管内皮功能进行了研究，结果表明绿茶或者红茶不仅使内皮细胞NO合酶的活性显著增加，而且可以引起老鼠主动脉环内皮依赖的血管舒张，同时还发现饮用绿茶或者红茶2h后可以增加健康女性体内血流介导的血管舒张(FMD)。

大量的临床流行病学及实验室研究资料表明同型半胱氨酸(Hey)是动、静脉血栓形成的独立危险因素。裴晶晶等研究发现茶多酚可逆转Hcy引起的PAI-1/t-PA比值紊乱，使比值维持正常，从而修复Hey引起的内皮细胞纤溶损伤，增强纤溶功能，防止血栓的发生。

此外，茶多酚还通过抗凝血、促纤溶作用，防止血栓形成。洪允祥等通过对54例冠心病患者15年动态观察证实茶多酚可使血浆纤维蛋白原含量显著下降，抗凝血酶Ⅲ含量升高及活性稳定，使凝血因子Ⅷ相关抗原显著减少，并明显抑制血小板的聚集，预防血栓形成的作用。

动脉粥样硬化

动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是严重危害人类健康的常见病，是以血管内皮细胞完整性破坏，巨噬细胞游移，平滑肌细胞和成纤维细胞增生，以及细胞内外脂质积聚为主的一种病理过程；是以内膜粥样斑块或纤维斑块形成为病变特征的动脉疾病。

宋小鸽等对50例心血管病患者进行临床试验发现，服用茶多酚口服液后，患者动脉硬化指数(AI)与服药前比较有明显下降，表明茶多酚有抗动脉硬化的作用。

关于AS的发病机制存在多种假说，但具体机制至今尚未有定论。近年来研究表明低密度脂蛋白发生氧化修饰成氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)是导致动脉粥样硬化(AS)发生的独立危险因素。因此有效地抑制LDL的氧化修饰，对防治AS具有重要的意义。有研究表明，茶多酚是LDL氧化的强抑制剂，能有效地抑制LDL的氧化修饰来预防AS。

Inami等在40名健康志愿者身上就儿茶素对血浆氧化修饰的LDL的影响进行了研究，结果发现4周后每日口服500mg儿茶素的儿茶素组，其血浆氧化修饰的LDL水平明显降低，由9.56±9.2U/mL降至7.76±7.7U/mL。

但也有不一致的结论，Davies等在患有轻度高胆固醇血症的成年人身上未发现喝红茶能改变血浆中OX-LDL水平。

冠心病

冠心病(Coronaryarterydisease，CAD)又称冠状动脉性心脏病，是由于冠状动脉粥样硬化使血管腔狭窄或阻塞导致心肌缺血缺氧引起的心脏病。

已有大量流行病学资料表明，饮茶对冠心病的发生存在保护性作用。Geleijnse等，Mukamal等，Pyshchyta等对饮茶与心肌梗死的关系进行流行病学调查，表明喝茶可显著降低心肌梗死的发病率和病死率。deKoningGans等对37514个人进行13年的调查分析证明，每天饮茶≥6杯可显著降低冠心病死亡率。Ruxton和Mason于2011年2月检索了红茶消费与冠心病关联的流行病学研究，10项列队研究，1项病例对照研究，其中8项证实了饮用红茶(每天≥3杯)可显著降低患冠心病风险。但并不是所有流行病学研究结果都一致，Sesso等和Hertog等的调查结果则表明饮茶与降低冠心病发病率之间无明确关系。

临床上，Lagiou等在希腊进行的一项病例对照研究表明一种大量存在于茶中的多酚类化合物Flavan-3-ols与冠心病的发病率呈现负相关，且每天摄入21毫克Flavan-3-ols，冠心病的患病风险就降低24%。Sano等在日本对203例行冠状动脉造影患者研究发现，每天饮用绿茶越多，患者冠状动脉显著性狭窄(左主干狭窄大于50%或者其他主要血管狭窄大于75%)的发生率越低。

在中国，焦世兰等针对冠心病的患者，采用200mg/粒的茶多酚胶囊口服，200mg/次，3次/d，对照组采用口服等量淀粉胶囊安慰剂，200mg/次，3次/d。治疗期间均常规口服硝酸异山梨醇酯10mg，3次/d，肠溶阿司匹林75mg睡前服，停用其他药物，疗程4周。结果表明，茶多酚治疗能改善患者心绞痛、呼吸困难、心慌胸闷、心悸、气短、疲乏无力等临床症状，治疗总有效率为90%明显高于对照组(53.33%)，这可能是因为茶多酚通过对冠心病OX-LDL明显的氧化抑制作用，而达到抗动脉硬化、防治冠心病症状加重的作用。

糖尿病肾病

糖尿病肾病(DN)是糖尿病长期代谢异常引起肾小球损伤的一种疾病，是糖尿病的严重并发症，也是影响糖尿病预后最重要的因素之一。

为观察从茶叶中提取研制而成的纯中药制剂茶色素胶囊对糖尿病肾病(DN)的治疗效果，采用口服降糖药或胰岛素治疗的常规组与常规治疗加用茶色素胶囊治疗的茶色素组作对比。结果表明，茶色素能使DN患者的重要症状明显改善，降低尿白蛋白、空腹血糖值和糖基化血红蛋白的含量(P＜0.05—0.01)，对血液流变性和自由基代谢指标，也有较好的改善作用，且疗效优于常规组(P＜0.05—0.01)，提示茶色素是通过其有效成份的抗炎，抗变态反应，改善血液流变性，抗氧化、清除自由基作用而发挥其临床效用的。

鉴于心血管疾病往往又是多种高危因素相互交织的结果，导致了目前此类患者需同时服用不同药物的局面，这不可避免造成不良反应发生率增加，另又造成大量的经济浪费，为此研发一种标本兼治、疗效全面、服用方便的药物已成当务之急。通过对茶中功效成分的研究，发现茶多酚、茶色素等具有明显的调理血脂、降低血压、增强血管内皮功能、降低血液黏度、抗氧化等作用。目前，我国已经成功将茶多酚开发成了治疗包括高血压、动脉粥样硬化及冠心病等在内的心血管疾病的中成药(心脑健)，并已在临床上推广应用。

茶学博士，教授，博士生导师。浙江大学茶学系副系主任，浙江大学茶叶研究所副所长，浙江大学浙西南农推中心主任，浙江省茶叶学会秘书长，浙江大学茶文化与健康研究会秘书长，国家一级评茶师，国家职业技能(评茶员/茶艺师)竞赛裁判员、高级考评员，浙江图书馆文澜讲坛客座教授。

茶叶防癌有效成分及其作用机理研究

当前，运用天然食物成分进行人类肿瘤的化学预防是国际上的重点研究课题。茶的广泛保健作用，自古以来就有记载。近年来，国内外科学家运用现代科学技术研究茶的防癌作用，取得了不少结果。迄今为止的研究表明：（1）能在人体（人）内外阻断能对抗多种致癌物在多种生物学短测系统中的致突变作用；（3）能抑制小鼠体内移杆性肿瘤的生长；（4）能防止多种化学致癌物对实验研究（包括实验动物模型和体外试验）中已得到充分证明。无论是哪种茶叶，对动物的化学致癌或移植性肿瘤，都有不同程度的防癌效果。然而，尚缺乏茶叶在人体（群）中预防效果的直接证据。 在茶叶防癌有效成份方面，国内外科学家都侧重于研究茶多酚及其所含儿茶素（以EGCG为主）的作用，而缺乏对茶中其他潜在的有效成分（如微量元素、维生素、茶多糖、茶黄酮类、酚酸类）的作用以及这些成分的相互作用的研究。在茶叶防癌机理的研究方面，国内外的初步结果表明茶能减少致癌物与靶细胞DNA加合物的生成，具有抗氧化功能（清除自由基），能恢复促癌剂所致的细胞间信息交流，能改善机体的免疫功能以及能杀伤多种肿瘤细胞株。但尚缺乏系统地从化学致癌各个关键环节同时研究多种作用机理的报导。 一、茶中有效成分的筛检 我们选用一组反映多阶段化学致癌过程的短筛试验对茶中18种主要成分进行了筛检，试验样品包括：绿茶水提取物、茶多酚（40%、70%、90%纯度）、儿茶素单体（EGCG、ECG、EGC、EC）、茶色素、茶多糖、咖啡碱、维生素C、维生素E、锌、硒、锰、钼。检测项目包括：对丝裂霉素C诱发的V79细胞基因正向突变及微核发生的影响；V79细胞代谢协作试验及Hela细胞存活和软琼脂生长试验。主要的发展为：（1）各种成分在短测试验中均显示出不同程度的效果。根据作用强度和在茶叶中的含量，我们认为主要有效成分为茶多酚及儿茶素单元体和茶色素。茶多糖和咖啡碱等也有一定的作用，但在茶叶中含量很少。这里应强调指出，尽管茶多酚及儿茶素单体在各项试验具有明显作用，但是如果按同等浓度计，任何单一组分的作用强度均不如茶的全部水提取物。（2）首次证明茶多酚的氧化产物茶色素与茶多酚同样有效，为进一步研究茶色素的作用奠定了基础。 茶的防癌作用机理 在茶及其成分的防癌作用机理研究方面，过去国外在茶叶的抗氧化作用以及DNA加合物方面有过一些报告。 我们从6个方面进行了探讨；所获得的主要结果为：（1）抑制致癌剂与靶器官DNA共价；（2）抗氧化作用椖芟灾抑制癌基因表达一饮茶或涂抹EGCG对促癌物（TPA）及香烟中特异性亚硝胺NNK诱发小鼠c-myc、PCK、C-raf和c-H-ras以及ODC基因表达均有抑制作用。（4）抑制肿瘤细胞增殖椂韵赴腄NA合成有抑制作用，他可能并非是对肿瘤细胞特异性表现；同时，细胞周期分布试验的结果表明ECG和EGCG主要抑制细胞由G期向S期移行，这一作用可能是抑制细胞前体物掺入的主要原因。（5）免疫调节棽韬筒璩煞侄砸浦残灾琢龊突对HIV和 肝病毒在体外室验中均无明显抑制作用，提示茶叶及其成分可能主要对化学致癌过程有预防作用。根据所获结果，我们认为抗氧化、预防DNA损伤以及免疫调节是主要的机理，尽管在各种机理之间可能存在着相互作用。这些结果为今后进一步阐明茶的防癌机理指明了方向，同时也为验证茶及其成分的防癌效果提供了有力的依据。 癌症高危人群的干预试验 茶的防癌作用已有比较充分的实验证据，包括体外试验和动物试验。然而，茶的防癌作用最终还需要人体证据的支持。 人群流行病学研究结果目前尚有不同结论。中国和日本的一些初步研究结果表明，饮茶与癌症死亡率呈负相关，而某些西方学者的流行病学研究所得的结果为正相关。如德国学者（F.J.Tener等）报导在香港做的调查表明，在200名女性肺癌患者中，饮茶者患肺癌的相对危险性为2.7（以饮自来水者的危险性为1）。英国学者（Kinler）也报导胃、肺和直肠癌死亡率均与饮茶呈正相关。由于影响癌症发生的因素很多，在流行病学调查中很难控制除饮茶以外的众多混杂因素。因此，只有进行人群干预研究才能得到确切的结论。但人群干预研究需要的人力、财力很可观，还需要很长时间。因此，迄今尚无具有说服力的人群干预研究结果。 我们近年来试图在癌症高危人群中应用生物学标志作为中间终点，来观察茶及其成分对癌症发展的预防作用，在三项干预试验中有两项荼得了可喜的结果。（1）对口腔粘膜白斑患者的干预研究椏谇话┓⑸收际澜缍裥灾琢龇>3%。近年口腔癌发病率在我国及美国、日本、法国等国家有上升趋势。口腔位于消化 道的上部，易观察和取材，是进行癌症化学预防研究的较好模型。口腔粘膜白膜白斑的发展和恶变是预防口腔癌的重要措施。本研究用混合茶（绿茶水冻干物、茶多酚和茶色素的混合物，口服胶囊，3g/人/天，同时局部涂抹患处）作为受试物，以口腔癌癌前病变口腔粘膜白斑中层得为研究对象（干预组29人，对照组30人），以其癌变过程中的中间标志物，如口腔粘膜细胞微核形成、细胞增殖抗原、银染核仁区等中间标志物，作为观察终点，进行饮茶对口腔癌前病变的随机化双干预试验，观察期为半年。试验结果： 饮茶对口腔脱落粘膜细胞微核细胞率的影响：口腔粘膜白斑患难与共者无论是病损区（10.5%）还是正常区（5.2%）的粘膜脱落微核细胞率均显著高于正常组（1.4%）。病损区脱落粘膜微核细胞率高于正常粘膜区微核细胞率。对照组在试验3个月和6个月后，均无明显改变。而试验组于3个月、6个月后，病损区和正常区粘膜脱落微核细胞率病损区分别下降36.4%和48.7%,正常区粘膜发别下降25.0%和41.3%，试验能试验前后和对照组相比，均有显著性差异。结果提示，饮茶对人口腔粘膜上皮细胞的DNA损伤有保护作用 饮茶对外周血淋巴细胞微核试验发生率和染色体畸变率的的影响：口腔粘膜白斑患者外周血淋巴微核试验细胞率和染色体畸变率均高于正常人。试验组在试验6个月后，与试验前和对照组相比，外周血淋巴细胞微核细胞率和染色体畸变率分别减少48.7%和31.8%，经统计学处理幸免有显著性差异。 饮茶对口腔粘膜组织银染核仁组织区（AgNOR）、细胞增殖抗原（PCNA）、和表皮生长因子受体表面的影响（EGFR）：试验组在试验6个月后，与试验前和对照组相比，试验组AgNOR颗粒数和PCNA增殖指数分别下降29.9%和32.8%（有统计学显著性）。结果提示混合茶在保护组织DNA损伤的同时，也降低了口腔白斑细胞的增殖活性。 临床观察：口腔白斑患者服用混合茶并对病损区粘膜涂抹混合茶6个月后，有37.9%患者的白斑缩小，与对照组相比有显著性差异，结果表明混合茶可阴断白斑病损的发展。 鉴于在试验期间，患者没有服用其客观存在药物，试验组与对照组日平均蔬菜、水果摄入量无显著性差差异；因此，口腔粘膜微核细胞率的降低、组织PCNA增殖指数和AgNOR数目的减少，以及病损区的缩小，均很可能与茶对口腔粘膜组织DNA 损伤的保护作用和对口腔粘膜组织增殖的抑制作用有关。由此可推论，饮茶可阻断口腔癌癌前病变的发展，降低其癌变的危险性，从而对口腔癌有预防作用。本次结果提供了饮茶可能预防人类肿瘤的直接依据，填补了国内外这方面的空白。 对吸烟引起人体DNA 损伤的保护作用1/4至1/3的人类肿瘤有关，尤其是肺癌。香烟中含有多种致癌物、促癌物和大量的自由基，是人体接触的主要致癌物之一。尽管香烟中有众多的致癌物，成分复杂，且致癌机理也是多方面的，但学者们认为氧化损伤和DNA 损伤是其中两个重要方面。我们以习惯性吸烟者为对象，分别饮绿茶、红茶和混合茶，以及茶多酚片作为干预措施，以反映DNA损伤和氧化损伤的一系列生物学反映标作为终点，观察饮茶的保护作用。 综合以上结果，可以认为绿茶水、红茶水、混合茶水和茶多酚均能保护吸烟所致的氧化损伤和DNA损伤，其中尤以混合茶和绿茶的作用更为突出。鉴于吸烟与人类癌症的关系已得到公认，而氧化损伤和DNA损伤又被认为是吸烟致癌作用的重要机制；因此，本次研究的结果为茶对人体化学性致癌的保护作用提供了有意义的依据。然而，由于本次实验对象吸烟量较少，而且生物学标志的个体差异较大，；因此，有些结果虽有明显趋势，但没有统计学上的显著性差异。我们认为如能扩大样本，增加吸烟量，重复本次实验，预计将会得到满意的结果。 对血清 胎蛋白（AFP）持续低滴度阳性健康状况人的干预研究一对以往曾出现过AFP低滴度阳性（1：5?/FONT>200）和HBsAg阳性的30岁以上男性对象490人中，确定AFP仍为低滴度阳性并通过B超检查排除现症肝癌的158人作为混合茶干预研究对象。最终实验组80人，服用混合茶胶囊，每粒胶囊0.3克，每天8粒（2.4克），分早晚2次服用。对照组78人，服用淀粉胶囊作为安慰剂。试验期为10个月。其中随访和复查3次。复查内容包括各项生化指标及时性 型肝炎标志物、B超检查等。此外，在实验开始时对所有对象均进行了流行病学调查，调查项目包括肝炎肝硬化病史、家庭肝病史、肝癌史、个人史（吸烟、饮酒、饮茶）等。从肝癌发生率和其它观察指标结果来看，在本研究中未发现混合茶对原发性肝癌的发生发展具有明显抑制作用。分析其原因可能是由于原发性肝癌是多病因的，目前已经明确的有HBV感染、黄曲霉毒素污染、饮用水污染以及遗传背景等，以生物学病HBV感染为最。因此，本次研究中未见到茶对肝癌的保护作用很可能反映了客观事实。至今为止对茶叶抗癌作用及其机理的实验研究主要集中在对化学致癌物（如亚硝胺类化合物、AFB1、BaP、烟雾等）致癌作用的预防和抑制方面，饮茶可保护生物性致癌物（HBV、EBV等）方面的实验证据尚不充分。由于不同的肿瘤各有其不同的病因，致癌机理也并非完全一样，因此，茶的防癌作用可能只表现在特定人群的某些肿瘤，而并非所有肿瘤。对以生物病因HBV感染为主的肝癌来说，茶的防癌作用可能会受到一定限制。此与我们用型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV DNA）转染细胞系（2.215细胞株）为模型，发现混合茶在体外没有明显的抗 型肝炎病毒（HBV）作用结果相一致。 茶色素是一种值得进一步研究的茶组分 长期发来，国内外学者都认为茶多酚是茶的保健作用的主要成分，而且认为茶多酚的抗氧化作用是茶发挥其保健作用的主要成分。茶色素是茶多酚的氧化产物。如果说茶多酚是绿茶和花茶的主要成分，茶色素则是红茶和乌龙茶的主要成分。原来认为茶色素既然是茶多酚的氧化产物，就不太可能保留茶多酚的抗氧化作用。 然而，我们的研究结果表明：（1）在短筛试验茶色素对丝霉素C诱发的V79细胞基因正向突变、V79细胞代谢协作试验及Hela细胞存活和软玉脂生长试验表与出与茶多酚相同的抑制作用；（2）在小鼠S180肿瘤模型中，茶色素显示出明显的抑癌作用。这些结果与过去国外和我们得到的红茶也具有防癌效果（NMBZA大鼠食道癌模型）的结果相一致。最近，我们以醌还原酶为指标进行体外试验，也发现茶色素的抗氧化作用至少不弱于茶多酚。考虑到茶色素几乎与茶多酚在茶中的含量（30~40%）相当，而且其化学性质远比茶多酚稳定，我们认为茶色素是一种很很进一步研究和开发的茶组分。如同茶多酚一样，茶色素是一个混合物，主要包括茶红素、茶黄素和茶褐素。在进一步研究茶色素的作用时，有必要同时对茶色素各种单一组分的作用进行比较。同时，鉴于国内在茶色素预防心血管病的临床观察方面已取得初步结果，我们建议同时开展茶色素预防癌症和必血管病的应用基础研究。

从茶中提取药用咖啡因方法的研究进展

摘　要　阐述了近年来从茶中提取药用咖啡因方法的研究进展，包括升华法、溶剂法、吸附法和超临界CO2气提法。

关键词　茶　咖啡因　提取方法

咖啡因亦称咖啡碱，属生物碱类物质，化学名为1，3，3-三甲基-2，6-氧嘌呤，分子式为：C8H10O2N4，溶点235℃～238℃时大量升华。咖啡因味苦、无臭，易溶于乙醚、氯仿、二氯甲烷，能溶于乙醇、丙酮、醋酸乙酯，难溶于乙醚和苯，是重要的医药原料。茶叶中约含2％～4％的咖啡因，是医用咖啡因的重要来源，因此，从茶叶中提取咖啡因技术的研究一直倍受重视，咖啡因提取方法的研究已取得显著进展。

1　升华法

近年来中外学者对升华法制取天然咖啡因的方法做了大量研究和改进，并申请了专利〔1～7〕。叶春园等把茶叶末投入备有搅拌器的升华罐中，用U形加热管中的电热丝把机油加热到(130±10)℃，用油泵把热油打入升华罐的夹层中，搅拌，用真空泵抽气，保持升华罐内的真空度为50.66 kPa,处理2 h，挥发物经导管进入冷凝罐冷水冷却，保持30℃～60℃，从冷凝罐的底部取出固体冷凝物(粗咖啡因)，加少量水溶解，漂去焦油，经结晶纯化后可得纯咖啡碱，10 kg茶叶下脚料可制得180 g咖啡因，得率1.8％。陈友仁等设计了新的咖啡因提取装置，升华罐与冷凝罐直接连接，升华罐底部用远红外加热炉加热，冷却分离罐由分离罐体、收集网、环形集水槽、水冷却夹套进出水管、烟道和搅拌驱轴组成。该装置不仅可以完成从茶中提取咖啡因的加热升华，而且能直接将升华物冷却，分离出咖啡因结晶，提取时间短，产量高，纯度好。该装置提高了咖啡因的提取率，避免了污染。Ramaswamy采用静电沉淀法回收粗咖啡因，经浓缩、结晶纯化得纯咖啡因。毛小源对结晶箱进行了改进。

2　溶剂法

中外学者对溶剂法提取咖啡因进行了大量研究，并提出改进方法。Bochorishvili在茶液中先加醋酸铅和Na2HPO4，对茶叶汁进行去杂质纯化，纯化后的茶汁中再加入1％量、浓度为2％的KMnO4及浓度为30％的NaOH进一步纯化，这样可提高咖啡因的提取率〔8〕。Mitchell在茶浸提液中加入Na2CO3除茶多酚等杂质，然后用二氯甲烷萃取咖啡碱〔9〕。仓公敖等研究了从茶叶中提取咖啡碱的方法，并申请了专利，提取率为1.01％～1.68％〔10〕。石天齐也申请了咖啡因制备方法的专利，方法是：茶叶与水混合(为1∶6)煎煮20～60 min后，用滤布过滤，滤液中加入10％～30％的金属盐溶液，如：AgCl2、HgCl2、Pb(CH3COO)2、Zn(CH3COO)2等，10～20 min后送入压滤机中压滤，滤液中再加入5％～30％的碱性溶液，可以是KOH、NaOH、Ca(OH)2等，进一步除杂，除杂后的液体，经用结晶法或氯仿萃取法最后都可获纯咖啡因〔11〕。

成锦遥等申请了咖啡碱生产专利〔12〕，方法是：将茶叶放入浸提塔中加水蒸煮2 h，通过沉淀池沉淀过滤、离心分离出提取液，进入清液池，蒸发浓缩至40％～60％，并按3∶1～6∶1的比例加入氯仿或二氯甲烷，混合均匀后送入萃取塔中萃取，萃取液在0～4℃下静置30～60 min,然后蒸馏、回收溶剂，罐中粗咖啡因取出后置≤100℃下恒温60～70 min,最后放入升华罐中升华，即得纯咖啡因。Tetsuo用水-氯仿混合物直接浸泡绿茶末，有机相中的咖啡因直接用结晶法获取咖啡因，2 g茶的产量为40.7 mg〔13〕。

李沿飞等采用6 mol盐酸调节茶汁至pH值为2，煮沸3 h，离心过滤，浓缩至1/2体积，再加入10％NaOH，调节pH至12，用氯仿分2次提取，合并有机相，用1 mol/L盐酸洗涤，弃去水相，蒸干有机相(回收氯仿)，固形物置100℃～105℃烘箱中烘干即得粗咖啡碱。粗咖啡碱用10倍水溶液，过滤、蒸发、重结晶、烘干。烘干后的咖啡因中通入1/5重量的氧化镁、咖啡因，氧化镁混合物置真空箱中升华，温度控制在160℃～200℃之间，收集升华物即可得纯度为99％的天然咖啡因〔14〕。葛宜掌等〔15〕将茶末放入浸提罐中，加入4～6倍茶叶重量的含水酒精(乙醇-水=4∶6)，加热浸提30～45 min,过滤，滤渣再用2～4倍含水酒精浸提30 min,合并滤液，浓缩滤液至原体积的1/5～1/7，冷却，待植物胶、叶绿素、多酚、植物蛋白及其他脂溶性杂质沉淀完全，上清液中再加入茶叶重量25％～30％的生、熟石灰混合物(生石灰-熟石灰=2∶3)作为剩余杂质的掩蔽体，搅拌均匀后干燥脱水成粉状。将粉状物投入升华罐内，在常压或减压下升华，即可得天然咖啡因，该法可提取出茶叶中75％～85％的咖啡因，其纯度可达99.9％〔4〕。

3　吸附法

硅藻土、活性炭等均可吸附咖啡碱，日本学者用20 mL乌龙茶汁通过填充有30 g硅藻土的吸附柱，然后用150 mL二氯甲烷洗脱，可将柱中99.8％的咖啡因洗脱。活性炭常被用作咖啡碱的捕集剂使用，在使用CO2气提法脱除植物中的咖啡因时，常被用作吸附CO2中咖啡因的吸附剂〔16〕。从活性炭中回收咖啡因的方法已申请了专利，是用70％的醋酸洗脱，洗脱温度不低于100℃〔17〕。

4　超临界CO2气提法

超临界流体分离技术是近20年发展起来的分离方法，它具有对有机物溶解度大、传质速率高，操作条件温和等优点。用CO2作为超临界溶剂安全、方便。国内外已有用超临界CO2流体分离提取茶叶中的咖啡因的报道〔18～22〕，该法通常使用的压力为12～22 MPa，温度40℃～80℃，CO2中可以加或不加夹带剂，常用的夹带剂为乙醇。该法目前生产成本较高，尚难为生产厂家接受，不过，该法可通过综合提取多种成分降低成本。对于茶叶来说，可同时获得茶多酚和咖啡因二种药用原料。

参 考 文 献

1　叶春园，等.CN，1039704A，1998

2　Feng Shixing CN，1056692，1991

3　Ramawamy S R. US，5，260，437，1993

4　陈友仁.CN，1067894A，1993

5　桑茂才.CN，2136244Y，1993

6　Ye C Y. CN，080，290，1993

7　毛小源.CN，2169979，1994

8　Bochorishrili E D, et al. Soobsheh Akad Nauk Gruz SSR,1968,51(1):121

9　Mitchell R H, et al. J Chem Educ,1974，51(1)：69

10　仓公敖.CN，1051481A，1989

11　石天齐.CN，1051481A，1989

12　成锦遥.CN，1067894A，1993

13　Tetsuoo. Kagaku to Kyoiku,1994,42(5)：367

14　李沿飞，等.CN，1082332A，1994

15　葛宜幸，等.CN，1097757A，1995

16　大须博文，等. Nippon Nogeikagaku Kaishi,1990,64(1):35

17　Kazz Saul Norman. EP，0，076，620A2，1982

18　Vitzhum O, et al. Ger P 2,127,642

19　Vitzhum O, et al. BP 1，333，362

20　柯昌强，等.中国茶叶，1996，(2)：36

21　冯耀声.科技通报，1994，10(1)：33

22　冯耀声，等.浙江化工，1995，26(4)：10

(1999-01-04 收稿)

茶多酚的医学开发研究

茶多酚类物质是目前与茶相关的药品和保健品开发的最主要成分，其中研究最为深入的是儿茶素。至今，在中国已经通过临床试验、并已获准使用的以茶多酚为主要原料的药品有：“天力体保”心脑健胶囊、“亿福林”心脑健胶囊、“可立宁”心脑健胶囊、复方心脑健片、复方茶多酚漱口液等。国外利用茶多酚为主要原料开发的药物也很多，如美国开发生产的Teagreen、日本用茶多酚制成的抗感冒药、日本的“克菌清”、匈牙利的茶多酚保肝药物等。

为了拓宽茶多酚应用范围、提高茶多酚的药效，最新研究趋势是对茶多酚进行化学修饰，使其成为油溶性或获得其他性状，从而有利于与脂溶性物质混合，扩大茶多酚与其他药物或材料的配伍。另一发展动向是研制茶多酚的新剂型，如微胶囊、纳米级剂型、针剂等，从而提高人体对茶多酚药物的吸收和利用度。

将中医的整体观思想方法与西医的研究方法及加工技术结合起来，开发新一代药茶和含茶药物，将可能成为今后很长一个时期内的研究热点。更多的茶叶功能成分通过与其他制药原料配伍，制成药效更好的新药。例如复方心脑健片是根据茶多酚卓越的医疗、保健作用而研究开发的一种医疗中药制剂。该方由茶多酚、银杏叶提取物、黄芪、女贞子等数味中药组成，经合理提取加工制得，具有益气通络、行气止痛、补益肝肾等作用，用于高血脂症、动脉硬化、冠心病、心绞痛、脑卒中后遗症及心脑供血不足引起的疾患。

茶多酚的含义及其功效

中国人爱饮茶，不止是喜欢茶清爽的口感，更是多年来养成的健康生活习惯。但你知道，茶叶中的什么成分起着益于身心的作用吗？今天，咱们就聊一聊茶叶中的瑰宝——茶多酚。

1.茶多酚是什么？

中文名：茶多酚

释义：茶叶中多酚类物质的总称

包含：黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等

重要含量：黄烷醇类物质（儿茶素），约占茶多酚总量的70%左右

特点：是形成茶叶色香味的主要成份之一，也是茶叶中有保健功能的主要成份之一

2.茶多酚含量知多少？

并非所有茶类的茶多酚含量都是一样的。茶叶发酵程度越深，茶多酚转化为其他物质的数量就越多，茶多酚含量就会相应减少。

而绿茶未经发酵，茶多酚含量相当丰富，有数据显示，绿茶中茶多酚含量比同等品质的红茶高出144％，比同等品质的乌龙茶高出59％左右。

除了种类，茶叶的品质也会影响茶多酚的含量。比如制作茶叶时，茶叶越嫩，品质就越好。因为嫩叶生长在顶端，最接近阳光，能够充分进行光合作用，会合成较多的酚性物质。

3.茶多酚有什么用？

抗衰老

茶多酚具有很强的抗氧化性和生理活性，是人体自由基的清除剂，可抑制皮肤线粒体中脂氧合酶和脂质过氧化作用，从而具有抗衰老效应。研究表明，1毫克茶多酚清除对人机体有害的过量自由基的效能相当于9微克超氧化物歧化酶（SOD），大大高于其他同类物质；茶多酚的抗氧性明显比维生素E强18倍，且与维生素C、E有增效效应。

缓解过敏

多酚能强烈的抑制组胺的释放作用，实验证明茶多酚抗变态反应和抗皮肤过敏反应比目前常用的抗过敏药的抑制效果强2~10倍。

排毒

茶多酚对重金属具有较强的吸附作用，能与重金属形成络合物而产生沉淀，有利于减轻重金属对人体产生的毒害作用。另外，茶多酚还具有改善肝功能和利尿的作用，因而对生物碱中毒有较好的抗解作用。

助消化

茶多酚中的咖啡碱能提高胃液的分泌量，可以帮助消化，增强分解脂肪的能力。所谓“久食令人瘦”的道理就在这里。

防辐射

茶多酚及其氧化产物具有优异的抗辐射功能，可吸收放射性物质，阻止其在人体内扩散，被称为天然的紫外线过滤器。

护齿

茶多酚类化合物可以杀死在齿缝中存在的乳酸菌及其他龋齿细菌，具有抑制葡萄糖聚合酶活性的作用，有效的中断了龋齿形成的过程。残留于齿缝中的蛋白质食物成为腐败细菌增殖的基质，茶多酚可以杀死此类细菌。

养颜

茶多酚是水溶性物质，用它洗脸能清除面部的油腻，收敛毛孔，具有消毒、灭菌、抗皮肤老化，减少日光中的紫外线辐射对皮肤的损伤等功效。

茶多酚对哪些病有益

癌症

绿茶与防癌，早就不是新话题了。茶多酚能清除有害自由基，阻断脂质过氧化过程，提高人体内酶的活性，从而起到抗突变、抗癌症的功效。据相关资料显示，茶叶中的茶多酚（主要是儿茶素类化合物），对胃癌、肠癌等多种癌症的预防和辅助治疗均有益处。

高血压

茶多酚具有较强的抑制转换酶活性的作用，因而可以起到降低或保持血压稳定的作用。

动脉硬化

茶多酚，尤其是茶多酚中的儿茶素ECG和EGC及其氧化产物茶黄素等，有助于抑制动脉粥样化斑块增生，使形成血凝黏度增强的纤维蛋白原降低，凝血变清，从而降血脂、预防肝脏及冠状动脉粥样硬化。

高血糖

茶多酚对人体的糖代谢障碍具有调节作用，能降低血糖水平，从而有效的预防和治疗糖尿病。

中风

茶多酚有遏制过氧化脂质产生的作用，能消除血管痉挛，保持血管壁的弹性，增加血管的有效直径，通过血管舒张使血压下降，从而有效地防止脑中风。

血栓

茶多酚对红细胞变形能力具有保护和修复作用，且易与凝血酶形成复合物，阻止纤维蛋白原变成纤维蛋白。另外，茶多酚能有效的抑制血浆及肝脏中胆固醇含量的上升，促进脂类及胆汁酸排出体外，从而有效的防止血栓的形成。

哮喘

茶多酚能抑制活性因子如抗体、肾上腺素、酶等引起的过敏反映，对哮喘等过敏性病症有显著疗效。

便秘

俗话说：“早茶一盅，一天威风”，茶多酚具有刺激胃肠道反应，加速大肠蠕动以达到治疗便秘的效果。

腹泻

茶多酚通过提高人体的综合免疫能力，抑制和杀灭引起腹泻的各种有害病原菌，并舒缓肠胃的紧张状态，以达到消炎止泻的效果。

坏血症

茶多酚能够促进人体对维生素C的吸收，从而有效地预防和治疗坏血症。喝茶让人健康，很大程度上得益于茶多酚的作用。健康生活，从一杯茶开始。

茶多酚的药理学研究概况

关键词：茶多酚(teapolyphenol,TP)是从天然植物茶叶中分离提纯出来的多酚类化合物的复合体。它大约占茶叶干重的25%左右，它包括有儿茶素类、黄酮及黄酮醇类、花色素类、酚酸及缩酚酸类等四大物质。目前，世界上许多国家和地区，特别是产茶的亚洲国家，如中国、日本、印度等，以及一些欧美国家都对这种多酚类化合物的复合体开展了大量的药理学研究和试验。在大量的研究中表明，茶多酚具有多种保健功能和药理效应，如抗菌、抗病毒、抗毒素、防癌、抗癌、抗突变、降血脂、降血糖、防止动脉硬化和血栓形成、保护肝脏、抗衰老、抗龋齿、抗过敏等，此外对于免疫系统的疾病，特别是艾滋病也具有良好的预防和治疗功效。由此可见，茶多酚作为一种资源丰富、成本低廉的天然药物有着十分广阔的前景。

本文将对茶多酚的多种药理作用进行总结，介绍一下它已知的药理学研究概况。

1　抗菌作用

茶多酚作为一种广谱、强效、低毒的抗菌药物已经被世界上许多国家的学者所公认。在众多的抗菌试验中，人们发现它对普通变形杆菌、金葡球菌［1］、表皮葡萄球菌［2］、变形链球菌［3］、肉毒杆菌［4］、乳酸杆菌［5］、霍乱弧菌、黄色弧菌、副溶血弧菌、蜡状芽胞杆菌、嗜水气单胞嗜水亚种、大肠杆菌、肠炎沙门氏菌［6］、绿脓杆菌、福氏痢疾杆菌、宋氏痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、黄色溶血性葡萄球菌、金黄色链球菌［7］等等许多致病菌，尤其是对肠道致病菌具有不同程度的抑制和杀伤作用。同时它还能有效地防止耐抗生素的葡萄球菌感染，对于溶血素，ECG与EGCG也具有抑制活性［1］。除此以外，茶多酚对能引起人体皮肤病的病原真菌，如头部白癣、斑状水泡白癣、汗状泡白癣和顽癣等寄生性真菌也具有很强的抑制作用［6］。

虽然茶多酚对肠道内的细菌有十分强大的杀伤和抑制作用，但是它对于肠道内的有益菌却起着保护作用，如它能促进肠道内双歧杆菌的生长和繁殖，改善人体肠道内的微生物结构，提高肠道的免疫功能，对增进人体健康有着积极的作用［7］。

从到目前为止的研究报道中看，对茶多酚抗菌活性成分的研究主要集中于儿茶素类(EC，ECG，EGC，EGCG)及黄酮类两种成分中，尤其是对儿茶素类成分的研究最多，涉及的方面最广，研究得最深入、最透彻。

2　抗病毒作用

茶多酚不仅是一种行之有效的较广谱的抗菌药物，同时对病毒也具有较强的对抗作用。

日本的岛村忠藤［8］发现，绿茶和红茶的提取物具有抑制甲、乙型流感病毒的作用。这两种病毒是利用其表面的突起潜入到动物的细胞内进行感染，在细胞内繁殖。岛村教授在研究中发现了茶提取物对抗流感病毒的作用机制是：流感病毒一般是分散聚集，比病毒更小的EGCG与免疫反应抗体一样粘附在突起的表面上，和病毒相粘连，而且EGCG还能粘附于动物的细胞壁上，完全抑制感染的编码。瑞士也有研究表明儿茶素对人体呼吸系统合孢体病毒(RSV)有抑制作用，其EC50为28uM［9］。除此之外，茶多酚对于胃肠炎病毒［10］、A型肝炎病毒［11］、植物病毒［12］也有较强的对抗抑制作用。

近年来，许多国家如英、美、日、中等对茶多酚类物质抑制人体免疫缺陷病毒-1逆转录酶鸟成髓细胞血症病毒逆转录酶［13］、DNA、RNA聚合酶的作用进行了大量的研究。日本学者Nakane,Hideo等经试验研究证实茶多酚确是一种新型人体免疫缺陷病毒逆转录酶的强烈抑制剂。我国学者陶佩珍等经研究印证，儿茶素衍生物对HIV-1 RT及DNA聚合酶具有抑制作用，并指出EGCG的抑制作用比叠氮胸苷三磷酸(AZT)的作用还要强。经动力学研究发现，EGCG是HIV-1RT底物脱氧胸苷三磷酸(dTTP)的非竞争性抑制剂，是模板多聚(rA)、寡聚(dT)12～18的混合型抑制剂，与Nakane报道相似。从构效关系上讲，ECG比EC活性提高86倍，而EGCG比ECG活性又高出12倍。这对于今后对艾滋病的治疗和研究工作开拓了一个新的领域。

3　抗癌、抗突变作用

对茶叶能防癌、抗癌、抗突变的研究在国内外许多国家都有报道。大量的研究证实茶叶不仅可以抑制多种化学致癌物(苯并芘、黄曲霉素、亚硝基甲脲(NMU)、乙酰基氨基(AAF)，3-甲基胆蒽(3-Mea)、二甲基苯并蒽(DMBA)、12-O-十四烷酰附邦醇-B-醋酸酯(TPA)、乙基亚硝胺(DENA)、N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MMNG)、亚硝酸钠、甲基苯甲胺等)诱致的突变，还能够抑制一些混合致癌物(烟草雾浓缩物、煤焦油、熏鱼提取物、X射线)的致突变作用［14］。因此茶叶对于食道癌、胃癌、肝癌、肠癌、肺癌、皮肤癌、乳腺癌、克隆癌等均有不同程度的预防和治疗作用，尤其是对消化系统的胃癌、肝癌具有积极的预防作用［15］。赵泽贞、黄民提等依据超氧化物歧化酶的原理，采用诱变及抗诱变同步的试验方法，检测了茶叶对癌症的诱变性及六种抗肿瘤药物(丝裂霉素C(MMC)、平阳霉素、氟脲嘧啶、顺氨氯铂、阿糖胞苷、盐酸氮芥)诱变性的抑制作用。结果证明：茶叶对癌症无诱变作用，而有抗诱变作用，对六种抗癌药物的诱变毒性也有抑制作用［16］。

4　抗氧化

人在正常的生命活动中，体内会因代谢而不断地产生有害自由基(free radical)，自由基的性质活泼，具有极强的氧化能力，可以诱发体内不饱和脂肪酸的氧化，产生过氧化脂质(lipid peroxidn LPO)。LPO在体内不断地产生和积累，就会削弱和破坏生物膜的正常功能，影响活性物质的正常代谢，促发肝炎、癌症、衰老及心血管等诸多方面的疾患。因此清除机体内有害自由基，对于保证人们的身体健康具有极其重要的意义。

从茶叶中提取出来的茶多酚是一类含有多酚羟基的化学物质，极易被氧化成为醌类而提供质子H+，故具有显著的抗氧化特点。正是由于茶多酚这种强的供氢能力，使其能够明显地清除体内的有害自由基。有试验证明，在刺激人多形核白细胞体系(PMIV)中，茶多酚对活性氧自由基(OFR)有很强烈的清除作用，而且其清除能力也大大超过了目前已知的抗氧剂VE和VC。有具体研究表明，茶多酚的抗氧能力是VE的18倍，是VC的3～10倍［17］。利用茶多酚的这种强氧化能力，在机体内清除自由基，阻断N-亚硝基化合物的生成，抑制脂氧合酶的活性和脂质过氧化作用［18］，使其在防癌、抗癌、抗突变、抗衰老、防治心血管疾病、治疗肝炎等诸多方面体现出优越的治疗功效。

美国的Katiyar Santosh.K等人在对绿茶的研究中为儿茶素(EC)及其衍生物(ECDS)的抗氧强度提供了直接依据，并揭示绿茶对于癌症，特别是皮肤癌具有良好的治疗作用［19］。日本的Osawa.T等的研究表明，在对绿茶和黑茶中提取出来的儿茶素和茶黄素有强烈的抑制脂质过氧化和DNA因氧化而被破坏的功能［20］，此外，还能够调动和激活体内的内源性抗氧化系统，提高SOD等酶类的活性，促使血浆LPO含量下降，达到保护机体的功能［21］。

茶多酚在抑制氧自由基，抑制因体内组织中自由基代谢平衡紊乱所致过氧化脂质的损害作用的同时，抗氧化成分还能够防止和抑制毒化细胞及细胞间的传染作用。因此还具有保护肝脏正常代谢和解毒功能［22］。

5　心血管疾病

心血管疾病是一类最为常见的疾病，也是世界上死亡率最高的疾病。它的发病很高，特别是在中老年人当中尤为明显。这是因为由于年龄的增长，机体的各组织器官的功能开始减退，胆固醇开始在体内堆积，血液中脂质含量上升，血粘度升高，流动性下降，极易形成血检，使得血管壁增厚，管腔变窄，管壁的韧性变小，脆性增大，从而导致心血管系统的疾患，如高血压、冠心病、动脉粥样硬化、心肌梗塞、高脂血症等。近年来，国内外大批科学家的研究证明了茶多酚类物质具有抗凝、促纤溶、抗血小板凝集、降血压、降血脂、防治动脉粥样硬化、保护心肌等功效。

翁品光等［23］用实验犬在深低温体外循环手术的动物模型基础上，观察茶多酚对冠状窦静脉血中血清MDA浓度和SOD及CPK的活性变化，结果显示茶多酚具有较好的清除和抑制氧自由基，减轻心肌损伤的作用。

有人用茶多酚喂饲实验性高脂血症模型大鼠，六周后，大鼠血清中的胆固醇、甘油三酯含量就明显地低于高脂对照组(P<0.01)，高密度脂蛋白胆固醇却明显高于高脂对照组(P<0.05)，且呈剂量效应关系。提示人们茶多酚能防治高脂血症［24］。动脉粥样硬化(As)是诱发人类心血管的主要因素。日本有专利报导用茶儿茶素治疗动脉粥样硬化［25］，在我国利用茶多酚治疗动脉粥样硬化也已经进入了临床阶段。

日本的并木和子［26］提出茶热水浸出液中的EC，EGC，EGCG对胶原和ADP诱导的血小板凝聚都具有抑制作用。Sagesaka.Y等用雄性日本白兔血浆离心制得的实验用血小板作了EGCG与阿斯匹林抗凝效果的对照实验，证明EGCG在0.2mg/ml时就能完全抑制胶原引起的血小板凝聚，从IC50值比较其效果与阿斯匹林效果相当。有人用茶多酚喂饲实验性高脂血症模型大鼠，六周后，体外血检形成，红细胞变形能力、血浆纤维蛋白原含等多项指标也显示了茶多酚动物血液流变学的改善作用。

茶叶中多酚类物质的降压作用也是比较明显的，Yokozawa等［27］用腺膘呤诱致大鼠做成高血压和肾衰模型，然后用绿茶中提取的tannin进行治疗，在治疗中发现大鼠收缩期和舒张期的血压均有下降，尿中血管舒缓素、前列腺素E2及钠的含量增高，但血浆中肾素活性没有明显的改变，血管紧张素Ⅱ和醛固酮水平也没有改变。据报道茶多酚能够改善肾功能［28］，治疗肾衰竭［29］和慢性肾功能不全，抑制肾小球基底膜的增厚，治疗原发性及肾性高血压。

6　抗过敏及消炎作用

茶多酚具有抗过敏作用，在以往对其抗过敏作用的研究中，Oheu

Hirobum等［30］经实验证实，由茶叶中分离提取出来的四种儿茶素类成分：EC、EGC、EGCG和ECG能够抑制由化合物48/80诱导的大鼠外周胎大细胞的组胺释放。其中EGC、EGCG和ECG对组胺释放具有明显的抑制活性。Sugiyama K等［31］也作了同样的实验，表明60%抑制浓度的ECG、EGC、EGCG比目前的抗过敏药Tranilast的抑制效果分别强2倍、8倍和10倍。

Yumie,M等［32］和Hara,Massahilo［33］研究结果发现，茶多酚对透明质酸酶具有显著的抑制作用。其中茶黄素双没食子酸的抑制活性达99.1%。儿茶素主要抑制快速过敏反应，而对迟发性的过敏反应作用不大［34］。

此外，有动物实验表明：(-)-epicatechin还具有消炎抗感染活性，它可以有效地抑制角叉素诱导产生的大鼠的足部水肿。并且还对囊液的蓄积，内芽组织的生成及慢性关节炎有良好的治疗作用［35］。

7　对免疫系统的调节作用

日本的Mizoguchi, Yasuhiro等人［36］，通过研究发现Cianidanol能够促进人体外周血液中单核细胞的淋巴转化，刺激巨噬细胞激活因子，使巨噬细胞活性增加。同时引起白细胞介素1分泌增强，从而达到增强机体免疫功能的作用。此外，他们又经过一系列的体外试验，如淋巴转化、巨噬细胞活性、T细胞E花环的形成以及抗原反应后指出Cianidanol可以作为一种免疫刺激性药物被应用［37］。

有趣的是，匈牙利Feher,J等［38］在对慢性肝炎、肝损伤的研究中还指出Cianidanol在某些试验中表现出一定的免疫增强作用，而在其它一些试验中又显示出一定的免疫抑制作用。茶多酚在免疫功能上的调节作用还有待于更进一步的深入研究和探讨。

8　其它

茶多酚不仅具有以上几方面的药理作用，而且还具有胃肠保护功能，对降血糖、治疗糖尿病也有一定的功效。此外，还有零星的报道表明茶多酚可用于抗龋齿、消除口臭、减肥、美容等。

综上所述，已有国内外众多的学者报道了茶叶中的茶多酚类物质诸多的作用。茶多酚的抗癌、抗衰老、降血脂、防治动脉硬化、保肝护肝等作用，可能与其抗氧化，清除机体内有害自由基的作用有关。目前，茶多酚已被批准作为一种食品抗氧剂应用。在匈牙利，儿茶素作为保肝药物已经上市。在国内，茶多酚也已作为心血管治疗药物投入生产。但是，茶多酚其它方面的药理作用还只停留在试验阶段，还需要我们更进一步地深入研究，使其能尽早地在临床治疗中发挥作用。

参考文献

1　Mori,Akihisa et al. Phytocheistry. 1987,26(8):2231～2234.

2　Niahino,Chikao et al. Agric.Biol.Chem. 1987,51(1):139～143.

3　Sakanaka,Senji et al. Agric.Biol.Chem. 1989,53(9):230～2311.

4　Hara,Yukihiko et al. Nippon Shokuhin Kogyo Gakkaishi.

1989,36(12):951～955.

5　Nishiyama Pyuzo et al. Nippon Nogei Kagaku Kaish.

1975,49(12):629～633.

6　陈宗懋.茶叶文献《茶对人体的生理调节机能》.

7　Okubo T. et al. Biosci. Biotech. Biochem. 1992,56(4):588～591.

8　日本工药信息，1990，2(2)：24.

9　Bumard D.L. et al. Chemotherapy. 1993,39(3):212～217.

10　Sakanaka, Senji et al. Jpn. Kokai Tokkyo Koho JP. 01,265,023

［89,265,023］ (cl. A61K31/35) 23 Oct. 1989,Appl. 88/91,155,13 Apr.

1988,5pp.

11　Crance, J.M. et al. J.Med Virol. 1990,31(2):155～160.

12　Okasa, Fumio JARQ 1978,12(1):27～32.

13　Inouye, Yoshio et al. J.Antibiot 1989,42(10):1523～1525.

14　中草药.1993，24(9)：496～502.

15　张志学.茶叶.1986，1：6.

16　中国中西医结合杂志，1992，12(10)：620～621.

17　陈德彪等.福建茶叶，1990，3：14～16.

18　肖伟祥等.蚕桑茶叶通讯，1991，3：5～7.

19　Katiyar, Santosh K. et al. Cancer Lett (Shannon.

Irel)1994,79(1):61～66.

20　Osawa, T. et al. Int. Congr. Ser. Excerpta Med.

1994,1058(Frontiers of Reactive Oxygen Species in Biology and

Medicine):333～336.

21　杨敏等.中国肾脏病杂志，1994，10，10(5)：287～289.

22　Leginov A.S. et al. Ter Ared. 1986,58(2):73～76.

23　翁品光等.江苏医药，1993，19(7)：370～371.

24　沈新南等.营养学报，1993，15(2)：147～151.

25　Tsunoda Takami et al. Jpn Kokai Tokkyo koho JP

06,56,686［94,56,686］ (cl A61K35/78) 01 Mar. 1994 Appl 92/227,870 04

Aug. 1992;5pp.

26　并木和子.日本食品工业学会志，1991，38(3)，189～195.

27　Yokozawa. Takako. et al. Biosci. Bioteehnol Biochem.

1994,58(5):855～858.

28　Oora Hikokichi: Yokozawa, Takako (Tsumura & Co) Jpn. Kokai

Tokkyo Koho JP 05,43,459［93,43,459］ (cl. A61K31/35) 23 Feb 1993,

Appl. 91/223,667 09,Aug,1991:5pp.

29　Tokozuwa, Tuakako et al. Jpn. J.Nephrd 1993,35(4):321～327.

30　Oheu, Hirobumi et al. Fragrance J 1990,18(11):50～53.

31　Sugiyama K. et al. The Organizng Committee & ISTS. 1992,342.

32　Yumie,M. et al. J.Food HYg. Sec. Jpn. 1990,31(3):233～237.

33　Hara Massahiko et al. Jpn. Kokai Tokkyo Koho JP

06,09,391［95,09,391］ (cl. A61K31/35) 18 Jan. 1994,Appl. 92/190,203

25 Jun. 1992,4pp.

34　Kim. Chang Johng, Chung, Tin Mo. Yakhak Hoechi

1990,34(5):348～364.

35　Swamalakshmi, T. et al. Indian J.Pharm. Sci. 1981,43(6):205～208.

36　Mizoguchi, Yasuhiro et al. Arerugi 1986,35(6):422～427.

37　Mizoguchi, Y et al. New Trends Peptic Ulcer Chronic Hepatitis,

Proc.Int Symp. Jpn Soc. Gastroenterol 1985,(Pub.1987)2,267～273.

38　Feher, J et al. Drugs. Exp. Clin Res. 1984,10(8～9):549～562.